双荧光素酶

       荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪（化学发光仪）测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。

       双荧光素酶体系，即有两种荧光素酶，常见的组合是萤火虫和海肾荧光素酶同时存在于一个载体中，萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素，而海肾荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。以其中一个作为内参对照，即表达量基本恒定，用于减少试验中组间的差异，包括培养细胞的数目及活力的差异，细胞转染及裂解的效率，而另外一个荧光素酶则作为报告基因，用于指示不同处理条件下基因的表达水平。该研究方法主要应用于microRNA的靶基因验证、基因的功能部位的核心区域预测、分子的结合位点的检测、分子间相互作用的分子机制以及体外环境变化对体内相关分子的调节作用。